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鱟試驗(yàn)法中的干擾因素有哪些?

發(fā)布時(shí)間: 2022-11-10  點(diǎn)擊次數(shù): 949次

試驗(yàn)的反應(yīng)機(jī)理我們可以知道內(nèi)毒素在二價(jià)陽離子參與下,作用凝集酶系統(tǒng)而發(fā)生一系列生化反應(yīng),最后形成凝膠。因此一切阻礙反應(yīng)機(jī)制的因素,均干擾凝膠的形成,形成假陰性結(jié)果,作為干擾凝集反應(yīng)的物質(zhì)主要有人血中的多種凝血因子、很多中藥成分、某些生化藥品、抗生素、可使蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)、高糖溶液、絡(luò)合物等等,此外樣品的pH值,反應(yīng)溫度等也都有一定的影響2。

 

 

另外一些金屬離子 Fe、Al、Ca會(huì)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素活性產(chǎn)生影響從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此在實(shí)驗(yàn)時(shí)避免使用一些金屬用具,而使用玻璃用具。

 

關(guān)于供試品中自身成分的影響,可以說是試驗(yàn)中影響因素最大的,作為供試品,既有對(duì)LALTAL試劑的活性產(chǎn)生影響的因素也有對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響因素,因此在實(shí)際測(cè)定時(shí)要引起注意。

 

1供試品對(duì)試劑的活性產(chǎn)生影響的因素為蛋白酶、蛋白酶抑制作用螯合劑、蛋白變性劑等。

 

2供試品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的活性產(chǎn)生影響的因素金屬離子鐵、鋁、鍺等),表面活性劑等。

 

3對(duì)主反應(yīng)以外的測(cè)定系統(tǒng)產(chǎn)生影響的場(chǎng)合濁度、顏色、磺胺制劑合成基質(zhì)化的偶氮化反應(yīng)時(shí)等。

 

 

在這些共存物質(zhì)的影響當(dāng)中,特別要引起注意的是些外界金屬離子的影響,尤其是在舊菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的溶解及稀釋過程中一定特別注意金屬離子的混入,最-好的方法是使用玻璃制備的蓋子。

 

對(duì)于大多數(shù)的注射劑般在原液時(shí)均存在干擾作用,然而當(dāng)把樣品用水進(jìn)行稀釋后即可排除干擾,而對(duì)于稀釋法不能排除干擾的樣品,可考慮用其他方法給予解決。如中和法、過濾法以及透析方法等,目前市場(chǎng)上見到試劑主要為TAL試劑和LAL試劑。因?yàn)楣に嚥煌?/span>,抗干擾能力的強(qiáng)弱不一,因此對(duì)同一樣品、使用不同廠家的LAL試劑所出現(xiàn)的最大無干擾濃度是不同的,這一點(diǎn)要引起注意。另外TAL試劑和LAL試劑是否完-全等活性關(guān)系還有待進(jìn)一步研究和探討。


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